Подготовка микропрепаратов

Исследование можно провести с помощью микроскопов: Альтами Школьный 1Альтами 104Альтами БИО 6 (бино)Альтами БИО 6 (трино)Альтами Школьный 2USB микроскоп Школьный 35Альтами БИО 8 (бино)Альтами БИО 8 (трино)Альтами Школьный
Приобретая микроскоп, необходимо помнить, что для полноценной работы с прибором вы должны располагать определенной совокупностью аксессуаров. Комплект предметных и покровных стекол, острый нож, пипетка, масло иммерсионное для микроскопии (для лабораторных микроскопов) – тот минимум, который позволит вам оптимально наладить работу с микроскопом.
Увлекательные биологические опыты способны овладеть вниманием любителей исследований микромира на длительное время. Но даже самое завораживающее изображение, видимое в объективе микроскопа, вначале становится привычным, а вскоре может показаться унылым. Пытливые умы ищут продолжения увлекательнейшему занятию ради познания и собственного удовольствия. Если вы хотите расширить границы удивительного мира, следует научиться готовить микропрепараты самостоятельно.
В предыдущих статьях мы затронули тему приготовления микропрепаратов – тонких срезов органов живого организма или микрочастиц, заключенных в просветляющую среду или высушенных, помещенных между двумя стеклами. Микропрепарат позволяет детально изучить объект или его часть под микроскопом. Вы уже знаете, как самостоятельно сделать наиболее простой временный микропрепарат кожицы лука или крови человека. Временный микропрепарат отличается от постоянного периодом хранения, а значит пригодностью к эксплуатации. Для сохранности изучаемого объекта в течение длительного периода используют «канадский» бальзам, глицерин с желатином или целлоидин. Для изучения объекта в течение нескольких дней достаточно поместить его во влажную атмосферу и хранить в холодном темном месте. В данном случае на предметное стекло помещают каплю воды, оливкового масла или глицерина. Нанесенная жидкость консервирует объект и «склеивает» покровное стекло с предметным.
Безусловно, вас заинтересует возможность увидеть под микроскопом живых простейших – организмов, состоящих всего лишь из одной клетки. Они представляют собой превосходный объект для изучения, так как могут долго жить в условиях, позволяющих вести наблюдение под микроскопом. Подготовим для исследования временный микропрепарат в «висячей» капле. Для этого из комплекта стекол выберем предметное стекло с лункой, которое необходимо предварительно очистить и обезжирить путем 15-минутного кипячения в слабом содовом растворе (чайная ложка на литр воды), вытереть досуха. Следует бережно обращаться со стеклами, так как их можно легко повредить.
В лунку укладываем несколько волокон ваты, чтобы замедлить движение простейших, взятых из природного водоема или аквариума - в статичном состоянии проще рассмотреть строение одноклеточного организма. С помощью пипетки перемещаем несколько капель воды на предметное стекло. Чтобы предотвратить испарение воды необходимо обмазать края покровного стекла (оно меньше предметного по размеру) вазелином или парафином, и только после этого покрыть основное стекло.
Можно провести биологический опыт с помощью стекол без специального углубления – исследование в «раздавленной» капле. Чтобы предотвратить деформацию объекта, гранями верхнего стекла проводят по пчелиному воску, в результате чего образуются «ножки». По центру нижнего стекла размещается тончайший слой волокон фильтрованной бумаги или ваты. Закрываем препарат таким образом, чтобы под верхнее стекло не попал воздух: подводим под углом нижнюю грань покровного стекла и плавно опускаем. В обоих случаях – микропрепаратах типа «раздавленной», и типа «висячей» капли - образуется герметичная камера, в которой жидкость долго не высыхает.
Для повышения качества исследования микропрепараты можно окрасить. Лучшим витальным красителем, не оказывающим токсического действия, является нейтральный красный в концентрации не более 1 к 200 000. Также хорошие результаты дает слабый щелочной раствор конго красного. Реактивы позволяют более детально изучить простейших и не нарушить при этом их жизнедеятельность.
Освещение играет важную роль: для изучения живых организмов в готовых микропрепаратах необходимо несколько затемнять поле зрения. В ярком проходящем свете детали строения простейшего практически неразличимы. Работу с микроскопом следует начать с установления слабого увеличения при суженной диафрагме. Затем поэтапно увеличиваем изображение, вращая револьвер объективов и регулируя фокусировочный механизм.
Как вы знаете, увеличение изображения получается прямым перемножением кратности объектива и окуляра. Сочетая сменные объективы с окулярами можно добиться наиболее высокого увеличения изображения. Но не всегда более высокое увеличение приводит к обнаружению новых деталей микропрепарата. Такой эффект носит название «бесполезного» увеличения, исправить который можно с помощью иммерсионных жидкостей, в частности, масла иммерсионного для микроскопии.
Погружая фронтальную линзу объектива в капельку иммерсионной жидкости, можно повысить его разрешающую способность. Существуют объективы масляной иммерсии, которые помечены черным кольцом. Объективы водной иммерсии маркированы белым кольцом, глицериновой и монобромнафталиновой иммерсии – желтым и красным кольцом, соответственно. Для биологических опытов используются масляные и водные объективы. Всего одна капля масла иммерсионного для микроскопии, помещенная между объективом и препаратом, обеспечит четкость деталей максимально приближенному изображению. После окончания исследования иммерсионный объектив нужно протереть мягкой оптической тряпочкой или батистовой, слегка смоченной специальной жидкостью для чистки оптики. Важно: любые другие виды объективов протирать нельзя!
Не следует применять вещества, не предназначенные для микроскопии: касторовое, вазелиновое, оливковое масла и другие. Только иммерсионные жидкости имеют более высокий показатель преломления, чем воздух. Поэтому, отклоненный мельчайшими деталями объекта свет не рассеивается, а попадает в объектив, что приводит к повышению разрешающей способности. Проще говоря, изображение становится четче за счет изменения коэффициента преломления среды, находящейся между объективом и покровным стеклом. В нашем случае, воздух мы заменили иммерсионным маслом. Знайте, что суррогаты могут содержать агрессивные компоненты, разрушающие покрытие линзы.
Придерживаясь определенных правил и используя специальные вещества, можно приготовить постоянный микропрепарат. Предполагая длительное хранение микропрепаратов следует использовать смесь «глицерин-желатин» или «Канадский бальзам». Остальные вещества хоть и обеспечивают консервацию объекта, но не обладают коэффициентом преломления близким к стеклу.
Мы подскажем вам, как приготовить просветляющую смесь «глицерин-желатин» для постоянного микропрепарата. Перенесите в чистую емкость желатин (10 г), который в течение суток вымачивался в воде. Помешивая на водяной бане набухшие гранулы, постепенно добавьте глицерин (15 г) и карболовую кислоту или формалин (2-3 капли). Отфильтрованная смесь «глицерин-желатин» хранится в герметичном сосуде. Изучаемый объект, предварительно извлеченный из спирта, заливается горячей смесью. Готовые микропрепараты хранятся в холодном темном месте. Приготовленный таким образом постоянный микропрепарат может сохраняться многие годы.
Как видите, приготовление микропрепаратов требует определенной сноровки. Успешного результата можно достичь, контролируя каждую стадию их изготовления. Много интересных образцов «поставляет» сама природа, что само по себе является хорошим мотивом для приобретения специальных знаний и умений. Усвоив основные принципы и технику приготовления микропрепаратов, можно создать собственный набор микропрепаратов.
Начинающему биологу приготовление микропрепаратов покажется трудоемким занятием. Чтобы подхлестнуть имеющийся интерес, стоит приобрести расширенный набор микропрепаратов Альтами, который содержит 40 различных образцов растительного и животного мира. Вы будете уверены в высоком качестве изображения, видимого под микроскопом - это неоспоримое преимущество. Среди готовых микропрепаратов вы найдете кожицу лука, хлебную плесень, хвою сосны, срез ветки липы и другие, которые послужат эталоном для приготовления собственных образцов. Микропрепараты спирогиры, гиалинового хряща кролика, продольного среза гидры и другие содержат редкие образцы, поиск и изъятие которых вызвало бы немало затруднений. Человеческие органы на примере среза позвоночника (нервные клетки), костной ткани, гладкой мышечной ткани (продольный и поперечный срез), кровеносных сосудов - предстанут в новом свете. В зимний период не найти насекомых, но микропрепараты дрозофилы взрослой, ротового аппарата бабочки, пчелы или комара вызовут желание приобрести сачок для ловли насекомых не дожидаясь начала весенне-летнего периода.
Как только вы научитесь изготавливать микропрепараты, вы пополните собственную коллекцию стоящими образцами. Но стоит начать ее с приобретения набора микропрепаратов Альтами.
Огромное спасибо за статью!